Hieff Canace^®II High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成，其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。该酶主要为NGS文库扩增所设计，克服了扩增不同GC含量模板带来的GC-bias，同时扩增效率比第一代的Canace高1.5倍，文库扩增产量大幅增加。本产品配备了单独的buffer，并增加了特殊的扩增促进剂，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性。

Q:Canace 具有保真性的原理是？错配率是多少？能保证不突变吗？

A:a）原理是具有 3’-5’的核酸外切酶活性，即有校正功能。

b）Taq 酶错配率：2*10-4，0.0002，大约 5kb 有一个碱基发生突变。Canace 约 0.00039%， 是 taq 酶的 52 倍。

c）高保真酶是突变概率低，但不是绝对的不突变。

Q:Canace 高保真酶是否为热启动高保真酶？

A:暂时不是热启动，后续会有热启动高保真酶。

Q:Canace 扩增产物是平末端吗？

A:是。因为高保真酶具有 3’-5’的核酸外切酶活性，会将 3’A 进行切除。

Q:Canace 扩增后是平末端产物，如何加 A 尾？

A:仅供参考：先对平末端 PCR 产物纯化后，浓度要求至少 20ng/ ul（跑胶图像条带清晰，明亮即可），取 14.5 ul PCR 产物，加入 2 ul Taq Buffer，3ul dNTP，0.5 ul Taq 酶，在 72℃反应 10~20min, 后直接回收纯化加 A 尾的DNA 片段。

Q:XX 品牌的高保真酶产品能用Canace 替代吗？

A:高保真酶都可以替代。只是在某些具体参数上有些区别。

Q:Canace 可以用于酵母菌液呢？

A:不建议用。若要用则需通过煮沸，反复冻融，加蜗牛酶等等处理方法破壁后尝试。

Q:Canace 能否用于 XX 长度的片段？

A:验证范围内长度理论上是可以的（验证范围：简单模板 20kb，复杂模板 10kb）。但具体能否扩出，还与模板和引物等有关。

Q:Canace 是否适合做多重 qPCR？

A:未验证过多重。

Q:Canace 的相关应用是？

A:平末端克隆，点突变，高保真性PCR。