泛素化是通过三个酶促步骤实现的。在ATP依赖的过程中，泛素激活酶(E1)催化与泛素形成活性硫酯键，然后转移到泛素载体蛋白的活性位点半胱氨酸(E2)。泛素级联对特定底物蛋白的选择性依赖于E2结合酶(细胞中包含的相对较少)和泛素-蛋白连接酶(E3)之间的相互作用，迄今为止已经鉴定出600多种这种酶。E3s是一个大的，多样化的蛋白质组，其特征是几个确定的基序之一。这些包括HECT(与e6相关蛋白c端同源)，RING(真正有趣的新基因)或U-box(没有Zn2+结合配体的完整补充的修饰的RING基序)结构域。而HECT E3s在泛素化过程中具有直接的催化作用，RING和U-box E3s促进蛋白质泛素化。 后两种E3类型充当适配器类分子。 它们使E2和底物足够接近，从而促进底物的泛素化。虽然许多RING-type e3，如MDM2和c-Cbl，可以单独发挥作用，但其他一些是作为更大的多蛋白复合体的组成部分，如后期促进复合体。综上所述，这些多面的特性和相互作用使E3s能够利用泛素-蛋白酶体系统，在真核生物的所有细胞中提供一种强大而具体的蛋白质清除机制。该筛选试剂盒集合了11种常用E2结合酶，可以筛选具有E3连接酶活性的蛋白所匹配的E2酶.

Q：试剂盒的20440-C Ubiquitin带标签吗？

A：不带。

Q：植物样本可以用这个试剂盒做泛素结合酶筛选吗？

A：可以的。试剂盒本身没有物种限制。

Q：试剂盒中的阳性对照反应体系的E2 Enzyme指的是哪个组分呢？

A：20440-I UBE2D1/UbcH5a (D1）、20440-J UBE2D2/UbcH5b (D2)或者20440-K UBE2D3/UbcH5c (D3)。

Q：试剂盒组分用原液吗？还是稀释液？

A：需要用原液，不能稀释，稀释可能导致蛋白酶降解。

Q：阳性体系里的E3浓度是多少？

A：0.2-2 μM.

Q：阳性体系里的底物浓度是多少？

A：1-5 μM.