推荐应用
腔肠素f(Coelenterazine f)系天然腔肠素衍生物,是水母发光蛋白的底物。腔肠素f与天然腔肠素结构上的差别在于氟(F)原子替换R-1位酚基上的羟基。腔肠素f和水母蛋白被氧化后活化,生成腔肠素的亚稳态复合物。该复合物生成时间非常短,而天然腔肠素-水母蛋白复合物的生成反应很慢(60 min内仅有40%的天然腔肠素完成反应)。与天然腔肠素-水母蛋白复合物产生的光子总数相比,此复合物仅产生80%的光子能。
腔肠素f与Ca2+接触时,可快速且高产量的发光,产能强度是天然腔肠素的20倍。同时,腔肠素f具有最好的细胞渗透性。当需要极高的Ca2+检测灵敏度来研究水母蛋白再生实验时,推荐使用本底物。
产品性质
运输和保存方法
冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存,最好保存在惰性气体环境下,避免接触空气。
腔肠素f工作液的配制
腔肠素f溶解:不溶于水。目前毒性最低的溶剂是100%乙醇,可配制浓度为0.1-1 mg/ml。加入pH低于7.0的酸性缓冲液(碱性pH会快速降解底物)稀释成低浓度工作液。切忌溶于DMSO。
腔肠素f保存:建议溶液现配现用!体外实验,需将稀释后的工作液室温放置20-30 min,方可稳定工作。该工作液可室温稳定放置3-4 h,有非常微弱的信号衰减发生。不建议储存液-20℃或更低温度保存,因为其高能量的二氧环丁酮结构即使在低温的情况下也会发生降解,导致荧光强度明显变弱。短时间保存条件:-70℃避光保存于塑料管内(溶液中不含有Ca2+),且有惰性气体保护。
注意事项
1.粉末最好使用惰性气体(氮气或氩气),在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃,长期保存于-70℃。管内即使存在少量空气,可能造成腔肠素n氧化失活,造成在不同试验间的量化分析结果无法比较。
2.本品接触空气,水或者任何氧化试剂会不稳定。
3. 本产品仅作科研用途!
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