Q:该试剂盒中裂解后一定要离心吗?
A:可以选做。
Q:测定时间为 10 s,测定间隔为 2 s,为什么这样推荐?如果这样设置,96 孔板这样设置,会导致每孔时间相差很大。仪器可以同时出数据。工程师建议设置动力学检测, 设置总时间。
A:不同仪器,设置时间可以不一样。单管手动检测,就按说明书设置会更好。
Q:酶标仪检测吗?
A:带有化学发光模块的可以。
Q:加入检测试剂后,产生的荧光稳定吗?多长时间内检测数据是准确的?
A:加入后海肾会有荧光猝灭的情况,越快越好,尽量 5min 内检测完成。
Q: 为啥11401试剂盒里要裂解细胞,40901这个单独的底物不需要啊?
A: 1、荧光素酶是表达在细胞内,是一种不存在于人类物种的水解酶(所以本底很低),它不能透膜。荧光素酶的底物是环状小分子,是疏水的,因而可以透膜的,因此只要存在荧光素酶表达,那必然是外源的,那么将底物加到细胞培养基中或打到体内均能得到信号。
2、报告基因体外检测需要细胞裂解是为了避免细胞转染异质性、底物渗透不均匀和信号不均一而强行匀质化的做法。体外报告基因检测是一个定量且灵敏度很高的实验,报告基因检测需要ATP和氧气的存在,裂解细胞是需要把表达的荧光素酶完全释放出来,能够有更好的反应,因为细胞内的氧气含量有限,如果不裂解,会导致信号一定程度的降低(有的裂解液也做了一些优化,比如额外加了ATP以提高信号等)。因此报告基因体外检测裂解细胞能够有更好的信号;
3、活体成像,检测仪器功率大,能够透过皮肤,细胞,有更强的穿透力,因此可以不用裂解细胞就可以检测到很强的荧光信号,还有就是活体成像检测比较糙,精准度都是相对的,