DAPI，也称DAPI dihydrochloride，是一种常用的核酸染料，可以和双链DNA富含AT序列的小沟结合，产生比自身强20多倍的蓝色荧光。和EB(ethidium bromide)相比，DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。DAPI也可对RNA进行染色，染色机理是其可以选择性嵌入“AU序列”并发出荧光。相比DAPI-dsDNA(Ex/Em=358 nm/461 nm)，DAPI-RNA具有较长的最大发射波长(500 nm)，其荧光亮度仅有DAPI-dsDNA的20%。

尽管DAPI不能通过活细胞膜，但可以通过提高浓度使之进入活细胞。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，Microplasm DNA以及染色体DNA。

DAPI典型的蓝色荧光特性使其非常普遍的搭配其他绿色、黄色或红色荧光染料用于细胞生物学多色荧光标记技术，因此也常作为核酸和染色体的复染剂用于细胞凋亡检测、RNA原位杂交、直接或间接免疫检测等领域，其染色后可用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。

本产品为溶液，浓度为5 mg/mL。另外提供粉末形式的DAPI（Cat No. 40727ES10）供客户选购。
 

产品性质

运输与保存方法
冰袋运输，5 mg/mL的DAPI储存液于-20ºC避光保存，1年有效。
 

注意事项

1）DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2）荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3）为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

4）低浓度的DAPI不容易穿透细胞膜。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6）本产品仅作科研用途！
 

使用方法

1. 配制工作液：
用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作的浓度（0.5-10 μg/mL）。

2. 固定的细胞或组织染色：

对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。DAPI染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行DAPI 染色。

a) 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量DAPI染色液，覆盖住样品即可。

b) 对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

c) 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

d) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm，发射波长460 nm。

3. 活细胞或组织染色：

a) 细胞培养物中加入适量DAPI染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。 

b) 在37℃培养细胞 10～20 分钟。

c) 用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

d) 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm，发射波长460 nm。

Q:  DAPI是一种好的活细胞核标记探针吗？
A:  DAPI被认为是一种半渗透性/无渗透性的细胞核染料。对细胞核的染色性能好坏依赖于细胞系类型。某些细胞系可用DAPI染色，某些完全不可以，而某些标记结果不一致。替代的话，建议用Hoechst 33342或Hoechst 33258，具有同DAPI一样的波长和核酸结合模式，但是有非常好的细胞膜渗透性。

Q．DAPI和Hoechst染料相当类似，如何二选一？
A：DAPI是非常通用的蓝色荧光染料，用于细胞核复染。对固定和透化的细胞/组织，具有非常明亮的细胞核标记。然而，此染料被认为是半渗透至不渗透的染料，用于活细胞染色的结合不一致。Hoechst 33342是一种细胞膜渗透性的染料，具有同DAPI的结合机制和荧光特征。非常适合用于活细胞成像，效果就如同DAPI用于固定细胞染色。