DiI、DiO、DiD和DiR是一系列亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构，这是一类环境敏感型荧光染料，当它们与膜结合或者与亲脂性生物分子（例如蛋白质，虽然在水中其荧光强度很弱）结合时，其荧光强度显著增强。这类染料具有很高的摩尔消光系数，极性依赖性的荧光和很短的激发寿命。

DiD是DiI的衍生物，具有明显往红光迁移的激发和发射光谱，这一特性使其特别适合标记具显著自荧光效应的细胞或组织。DiD可被633 nm的氦-氖（He-Ne）激光所激发，呈红色荧光，在进入细胞膜之前荧光非常弱，当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，进入细胞后，染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞染色。

产品性质
 

运输和保存方法

冰袋（wet ice）运输。产品-20 ºC干燥避光保存，有效期二年。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

3）本产品仅作科研用途！

使用方法

1. 染色液制备

（1）配置DMSO或EtOH储存液：储存液用 DMSO或EtOH配置浓度1～5 mM。
注：
a、未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，可稳定保存6个月。
b、发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。

（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。
注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化

2. 悬浮细胞染色

（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。
（2）37℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

（3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5 min。

（4）倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

（5）重复（3），（4）步骤两次以上。

3. 贴壁细胞的染色

（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

（3）在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
（4）37℃孵育细胞2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10 min，然后吸干培养基。

4. 显微镜检测

（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。

（2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

Q:使用范围？

A:可以直接染色活的细胞或组织，对于固定的细胞或组织通常用 4%多聚甲醛进行固定使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高，或者染色效果差。

Q:可以通透吗？

A：不建议通透，如果通透建议使用不含去垢剂的通透液，因为去垢剂通透液会与膜上的脂类物质反应，使荧光减弱或者影响定位增加细胞内的染色。

Q:有没有细胞特异性？会不会 293 细胞不好染，MSC 好染？

A:没有。染料是亲脂性染料，是通过插入到脂质膜中进而被激光激发观察，对于动植物细胞没有特异性 。

Q:可以染细菌细胞膜吗？

A:理论上可以，细菌有一层细胞壁，要先去除细胞壁，再染色。

Q:植物细胞和组织适用吗？

A:理论上可以，一般植物细胞或者组织要制成原生质体。

Q:可以染外泌体吗？

A:外泌体具备膜结构，理论上可以被染色，但未测试过染色效果，需参考文献，自行测试。

Q:该系列探针是只标记细胞膜还是细胞所有的膜结构均会被染上颜色？

A:DiI/DiO/DiD 和 DiR 是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散，逐渐使含有膜结构的细胞均被染色。