Q：加入去内毒素试剂后，溶液没有变得浑浊？

A：可能是本身内毒素低，也可能是加入 ER 溶液后，因为体系的 PH 差异、抑制物等，使得内毒素的凝集状态反应不一样。

Q：无内毒素质粒小提检测浓度很高？

A：客户的菌液量用了 20ml，太多了，导致 RNase 作用不足。

Q: 质粒浓度低

A: （1）拷贝数低或者大于10kb的质粒应加大菌体使用量，并按比例增加后续buffer的用量（2）细菌可能没有充分裂解

Q: 裂解液有沉淀

A: 裂解液中含有NaOH，可能盐离子析出，可 37℃温浴复溶至溶液澄清再使用。 ​

Q：质粒跑胶出现小于100bp小条带

A：可能RNA未去除干净（样本太多或者添加了RNase的缓冲液 RS酶活下降）或者裂解时间太长导致质粒受到破坏。

Q: 内毒素清除离心后分层不彻底

A: 提升离心温度；加大离心转速；增加离心时间。

Q: 提取的产量低

A: 中低拷贝质粒：长片段、表达型载体常以低拷贝为主，建议加大菌体使用量，菌液过夜培养

菌种问题：菌种保存中质粒丢失，养菌前先划线活化，稳定产量

菌体未充分裂解：在buffer种充分重悬，避免成团

试剂准备有误：有沉淀析出的溶液需要加热；加入的乙醇体积不准

洗脱不充分：洗脱液预热，二次洗脱

Q: 有基因组污染

A: 培养时间太长：培养时间建议控制在12-16h；裂解不充分。

Q: 下游结果不理想

A: 盐离子污染；乙醇污染；质粒降解；层析柱膜脱落。