Q:试剂盒提取的 DNA,用于 PCR 实验,扩增无条带?
A:可能是提取产量低、DNA 出现降解或者纯度低。DNA 提取实验包括样本预处理及 DNA 提取两个环节,涉及到提取材料的新鲜程度、样本裂解-核酸的释放方式、柱结合能力等多个关键点。
Q:试剂盒提取产量低?
A:(1)可能是实验材料质量或样本量不足。(2)破壁或裂解不充分。植物要充分匀浆研磨充分,试剂盒中的破壁酶避免保存不当,洗脱液预热或多次过柱。
Q:DNA 出现降解?
A:(1)可能是实验材料不新鲜或反复冻融。(2)提取过程中操作过于剧烈,DNA 被机械打断。解决方案:尽量使用新鲜材料,低温保存材料避免反复冻融;液氮研磨或者组织匀浆后,后续操作尽量轻柔,DNA 洗脱液避免反复冻融。
Q:DNA 纯度低?
A:(1)杂蛋白、RNA 污染。(2)乙醇残留。Wash buffer 中需添加无水乙醇或避免乙醇挥发; 空管离心,保证乙醇挥发彻底。