Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团，因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板，以及用于该酶蛋白的脱磷酸作用等。

本品为小牛肠来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。

产品组分

产品性质

运输和保存方法

干冰运输。-20℃保存，有效期18个月。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！

使用方法

1 DNA去磷酸化

① 在1.5 mL离心管中加入下列试剂：

【*】单链DNA或含5’端突出末端的DNA推荐低温下孵育，平末端DNA或含3’突出末端的DNA建议在较高温度下孵育。

② 混匀上述试剂，于37℃或50℃孵育30 min。或者37℃孵育15 min后，再于50℃孵育15 min。

Q: 小牛肠碱性磷酸酶和虾碱性磷酸酶的差异是什么？

A：小牛肠碱性磷酸酶（CIAP）和虾碱性磷酸酶（SAP）都可以去除载体或片段的5’-末端磷酸基团，但失活方法不同。

小牛肠碱性磷酸酶，在底物浓度高时，CIAP的最适pH约为10；底物浓度低时，最适pH约为8，但特异性比高底物浓度时低。同时，其在保存条件下极其稳定，但在螯合剂存在条件下，经65℃、30分钟加热处理99%的活性不可逆失活。失活处理时，建议试用苯酚，从而使酶完全失活。

虾碱性磷酸酶，可以在65℃ 加热 5 分钟的条件下不可逆失活。同时，在进行去磷酸化反应之后，不需要纯化产物，可直接用于后续的连接反应。虾碱性磷酸酶也可以用来降解PCR反应中的游离dNTP，用于制备测序模板和 SNP 分析。同样无需纯化，可直接用于下游实验。