Q:全能核酸酶储存条件是什么?
A:保存于-20℃。储存 Buffer:20mM Tris-HCl pH8.0,50 mM NaCl,2mM MgCl2, 50% glycerin。
Q:反应pH 应在什么范围?
A:建议反应体系pH 值为 6~8
Q:反应中需不需要加Mg2+?
A:反应中Mg2+的终浓度为 5~10mM。
Q:样本黏度高,不易过柱,怎么办?
A:细胞破碎后由于含有大量 DNA 和 RNA,黏度很高,过柱不容易。解决的方法有两种:(1)用核酸酶。(2)也可以用高压匀浆。都可以达到降低黏度的作用。差别在于:用核酸酶,DNA 和RNA 可以绛解成小片段或单核苷酸;高压匀浆用机械剪切力将 DNA和 RNA 处理成较大的片断。超声波处理在处理小量表达的时候问题不大,但做大量蛋白表达的时候有困难。核酸酶的另外一个重要应用是:若你的目的蛋白是 DNA 结合蛋白,那么纯化的时候最好先用核酸酶处理。
Q:这个对于细胞培养基该怎么使用呢?Ph改变后会影响酶条件反应条件吧?(你们最优的条件是啥?影响因素多吗?)
A:细胞培养使用步骤可以参考说明书,有详细说明,全能核酸酶影响酶效的因素有很多,一下数据可以参考。
Q:为啥你们的酶活是一个区间?默克是一个大于250u/μl?
A:我我们对于酶活进行了区间测定,为了更准确的使客户有精确使用量,默克的是一个大于250u。
Q:你们的纯度确定和默克的区别?HPLC有什么优势吗?
A:我们的纯度测定是采用高相液相的方式(HPLC),默克的采用是SDS测定,纯度都大于99%。行业一般认为HPLC的方式会比SDS的方式更为准确些。