UCF.ME® UltraNuclease UCF.ME® 全能核酸酶
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UltraNuclease(全能核酸酶),又称非限制性核酸内切酶、广谱核酸酶;是一种来源于Serratia Marcescen的非特异性核酸内切酶,可在链内任意核苷酸间进行切割,将核酸完全消化成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸,能够在非常广泛的条件下(6 M Urea0.1 M Guanidine HCl0.4% Triton X-1000.1% SDS1 mM EDTA1 mM PMSF)降解各种形式的(双链,单链,线状,环状,天然或变性)DNARNA,广泛用于去除生物制品中的核酸。

本品经基因工程改造在Escherichia coli (E. coli)表达纯化,纯度99%,可用于科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液粘度提高蛋白纯化效率及功能研究,并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞(PBMC)的结团。

本品以无菌液体酶的形式提供,储存于缓冲液(20 mM Tris-HCl pH 8.02 mM MgCl220 mM NaCl50% Glycerol)中,无色透明液体。

FAQ

Q:稀释后每次用多少量,如何试梯度?起始加多少

A:看不同的实验要求,添加量可以按照 1/100-1/10000 之间。

Q:反应抑制因子有哪些?

A:在含有以下物质,Benzonase 的活性会降低 50%或以上:>150mM 一价阳离子,>100mM  磷酸盐,>100mM  硫酸铵,>100mM  盐酸胍,>0.1%SDS,>1%Triton X-100,>1%Tween 20。

Q:哪些溶液可以作为反应缓冲液?

A:常用生物缓冲液,如TBS、MOPS(pH6-8)等。

Q:怎样灭活 Benzonase 核酸酶?且如何去除?

A:采用 EDTA 螯合金属离子(浓度大于6 mM)会可逆地抑制 Benzonase 核酸酶活性,极端条件会造成不可逆失活,例如:100mM-NaOH,70℃处理 30min 等。Benzonase 核酸酶可采用阴离子交换柱或气相色谱法从目的产物中分离出去,由于这种核酸内切酶及其稳定,建议在终产物要求排除核酸酶的应用中不要使用Benzonase 核酸酶。

Q:全能核酸酶可否用于加入全血中,后续客户用于直接提取核酸,但有些全血会有结块拉丝的情况出现,A260/230比值偏大

A:我们目前没有客户这样做过,如果为了处理细胞结团,加进去反应后通过换液就可以把全能核酸酶给去掉;工业上病毒纯化中过柱可以把全能核酸酶去掉。您这个加了后进行核酸提取,不能保证全能核酸酶完全去除干净,一旦有残留,提取的核酸都会被切割降解。70℃30min可以灭活,不确定对您血液样本是否有影响,按说明书的条件是1ul全能核酸酶相当于可以处理10的9次方个细胞,200ul全血不知道有多少细胞没做过全血的,无法推荐,您可以拉梯度看看。

 

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