Q：40612 一步法快速支原体检测试剂盒（防污染版）的检测原理？

A：本试剂盒中加入了UDG 酶，以便去除含 dU 的PCR 产物气溶胶污染，在极大程度上抑制假阳性反应，提高检测的准确度。而且加入的 UDG 酶在室温下起作用，且对温度感、易于灭活，不影响实验结果。若细胞培养物被支原体污染，支原体 DNA 的保守序列会被大量、快速地扩增，使反应液由蓝紫色变成天蓝色，结果肉眼可辨，无需电泳。

Q：一步法快速支原体检测试剂盒使用方法（防污染版）？

A：本试剂盒使用更为简便，只需吸取 1μL 疑似支原体污染的细胞培养上清加入反应体系中，先将样品在 25~37 ℃放置 5 min，再在水浴锅或 PCR 仪中，恒温 63 °C 孵育 60 min。观察反应液由蓝紫色变成天蓝色，结果肉眼可辨，无需电泳。

Q：用 40612 一步法支原体检测试剂盒检测 DMSO、乙醇等有机溶剂中是否存在支原体污染，发现实验组均是天蓝色，是不是 DMSO、乙醇等时机中存在支原体污染？

A：支原体试剂盒在乙醇、DMSO 有机溶剂，以及强酸强碱环境中，不稳定易变性，导致颜色变色为天蓝色。这款试剂盒只能用于细胞检测，不可用于有机溶剂、强酸强碱环境下检测。

Q：我检测的是这个里面的液体，加入之后PCR管里的颜色立马变成了天蓝色？是什么原因呢？检测胰酶-EDTA，加入样品之后，直接变色了？

A：40612原理：Mg2++HNB=蓝紫色，随着PCR增加，焦磷酸不断增多，焦磷酸与Mg2+结合，HNB游离，显示天蓝色。这个试剂里面有磷酸二氢钠可能是这个离子与Mg2+结合而立马产生化学反应导致的，EDTA可以螯合钙镁离子，从而导致反应加速发生变色反应。

Q：阳性对照的浓度时多少？

A：10的5次方copies/ul。

Q：阳性对照里的是支原体吗？

A：不是的，是线性化的片段。