Q: 酶切法建库试剂盒针对哪些样本建库效果比较好？

A：OnePot/OnePot II DNA 建库试剂盒针对基因组DNA 和 cDNA 均可获得高产高质的文库。案例展示为 12204 应用于cDNA 文库构建（ds-cDNA）

背景：客户得到逆转录的ds-cDNA，全长 1.1kb 左右，想酶切至 300 bp 左右。

结论：Input DNA 50 ng 左右，酶切 4-10 min，PCR 8Cycles，产量>3μg,若需要更集中的文库，可进行双轮分选。

Q:gDNA 片段化参考说明书酶切条件酶切 20 min，竟然切不动？

A:一般优先考虑 DNA 的质量问题，比如 Input DNA 中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐离子，可能会影响酶切效果，建议将 DNA 稀释在 ddH2O 或不含 EDTA 的10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中再进行片段化。其次，如果样本是反转录得到的全长 cDNA，则需考虑样本纯度问题。另外，对于环状DNA 的酶切，需要另行摸索酶切时间体系。特殊样本可考虑磁珠纯化之后进行酶切或适当延长酶切时间。

Q:酶切时间也不长，竟然过度酶切了?

A:以插入片段 300 bp 为例，白细胞 gDNA，30 度酶切 10min，出现如下图过度酶切现象。建议参考酶切条件需要考虑不同样本 gDNA 大小，如白细胞 gDNA 较小，应适当缩短酶切时间，否则易出现如下过度酶切现象。