Q：为什么我激发后荧光很快就猝灭了？

A：可能是使用浓度过高造成，可以再适当降低一些试剂浓度；可以在寻找视野时使用低能量的激光，待找到合适视野时使用高能量激光激发观察。2.鬼笔环肽不能和点击反应（例：EDU）共染色，否则鬼笔环肽没荧光信号。

Q：该试剂可以应用于组织切片吗？

A：石蜡切片或者冰冻切片都不建议，可能效果不好，建议使用抗肌动蛋白的抗体。

Q：每次是添加多少试剂量（工作液）进行荧光显微镜检测？

A：建议添加的量是能够完全浸没细胞即可，不同的细胞染色情况不同，相应鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

Q：几种不同的鬼笔环肽的区别是什么，如何选择？

A：是荧光基团的不同，激发出的荧光颜色不同，用于区分共染时其他荧光染料的荧光颜色，对于选择需要机器满足激发和发射波长要求。

Q：细胞处理时，须用BSA 封闭吗？

A：是的，这样做可以降低背景色。

Q：鬼笔环肽染色存在种属区分吗？

A：对于对固定的细胞染色，不区分种属。

Q：想染植物细胞微丝，鬼笔环肽能不能使用？

A：由于植物含细胞壁，因此在未破坏细胞壁时染色进入细胞内较为困难，因此对于含细胞壁细胞染色可以去除细胞壁制备原生质体进行染色。

Q：染色后多久进行上机观察检测，可以放置过夜吗？

A：不推荐，染色后应尽量在 60min 内完成上机观察和检测过程。

Q：关于几种产品的状态及含量问题介绍？

A：iFluor 系列的 40737、40762、40736 均为粉末，40734 和 40735 均为液体形式提供。对于 300T

的含量不是指含有 300ul，具体的 300T 是指能检测 300 次左右。

Q：我用鬼笔环肽染小鼠的巨噬细胞，发现鬼笔环肽没有进入巨噬细胞中，而是在巨噬细胞的表面，

有什么更好的建议嘛？

A：巨噬细胞染色效果较差一些，建议延长透化时间，例如用丙酮（≤-20℃）脱水或者用 0.5% Triton X-100 溶液透化处理 10-15min。

Q：鬼笔环肽可以染活细胞，以及染色后可以用流式检测嘛？

A： 不推荐，荧光标记的鬼笔环肽不具有细胞透性，因此没有被广泛用于活细胞标记 。

Q：我的细胞过表达G-actin，会不会影响鬼笔环肽的染色效果？

A：不会影响鬼笔环肽的染色效果。因为鬼笔环肽只选择性结合于丝状肌动蛋白 F-actin，而不会与

单体肌动蛋白 G-actin 结合。

Q：鬼笔环肽可以双标染色吗？

A：可以，例如可以与 DAPI 溶液对细胞核进行复染。

Q：鬼笔环肽可以跟免疫荧光同时做吗？

A：可以和抗体共染，可以先染抗体，再做鬼笔环肽的染色。

Q：可以用那些溶液来固定细胞，要注意什么？

A：可以用溶于PBS 的 4%多聚甲醛溶液进行细胞固定，固定时避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇

在固定过程中可能破坏肌动蛋白F-actin。

Q：鬼笔环肽染色后，封片保存在 4 度冰箱一段时间后，再检测信号可以吗？

A：不建议这样操作，因为封片后鬼笔环肽的荧光信号会逐渐减弱。建议现加现测。