Fluo-3, AM是一种常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针。它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3， 从而被滞留在细胞内。Fluo-3游离配体几乎是非荧光性的，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。但是，当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，荧光会增加60至80倍，最大激发波长为506 nm，最大发射波长为526 nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488 nm左右，发射波长为525 - 530 nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。

Q:荧光探针用什么缓冲液稀释？

A: 工作液用最好是使用无血清培养基、HBSS 或是 PBS 等缓冲液进行稀释，稀释后的探针工作液即可直接加入细胞进行检测。

Q: 几种探针的应用的位置？

A: 如果是测定胞质内的钙离子建议选择 Fluo-3、4，如果是测定细胞器内较浓钙离子的实验建议采用 Rhod-2。

Q: 用完该产品贴壁细胞均出现脱落现象怎么办？

A: 建议老师降低浓度。

Q:加探针孵育前要把细胞先消化下来吗？

A: 根据后续检测确定是否需要消化后孵育探针，如果是流式细胞仪或荧光酶标仪检测，可以先收集细胞再孵育探针。如果显微镜观察，可以不用消化。

Q:该试剂盒仅限于对胞质的检测吗？细胞器内可以吗？

A: 该探针检测的是细胞内总的钙离子水平，不具体区分细胞器。