Exosome（外泌体）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息，不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

本试剂盒采用独特的分离技术，可以快速从细胞培养上清中获得大量完整的外泌体颗粒，适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

Q：外泌体洗涤那步为什么要保留上清液？

A：因为外泌体溶解到上清中了，这个转速下外泌体还是在上清中。

Q:是利用的磁珠法还是柱法？

A:这个不属于纯化，是生物试剂 PEG。

Q：最后得到外泌体沉淀了，为什么还要再洗涤弃沉淀，沉淀是什么？

A：去除提取的或试剂中的不溶性沉淀。

Q4:无外泌体血清培养基（或者无血清培养基）在什么时候使用？

A:细胞在正常含血清的培养基中培养一定的时间后，细胞融合度约为60%-70%时，移去原有含血清的培养基，换成新鲜的无外泌体血清培养基（或者无血清培养基），继续培养24-48h，细胞融合度达到80%-95%左右时收取上清，该上清液即可用于提取外泌体。

Q5:细胞培养过程中的死细胞是否会影响外泌体的提取？

A:会的。在收获细胞时，应确定死亡细胞占比不超过5%。细胞凋亡/死亡过程中会释放大量大小不等的囊泡，它们在外泌体的提取纯化过程中会污染活细胞产生的外泌体，同时有可能产生大量杂质。

Q6:加了抽提试剂离心之后无沉淀，这个现象正常吗？

A:由于某些细胞（如悬浮细胞、干细胞、神经细胞等）中外泌体含量比较低，加了试剂A离心之后肉眼可能无法观察到沉淀，在重悬时使用PBS液朝离心管离心外侧的内壁反复吹打洗脱即可（避免剧烈吹打）。针对提取后的外泌体先进行NTA粒径检测或BCA蛋白定量检测，再决定是否进行后继实验。

Q7:客户外泌体染色之后，是否可以用我们的细胞上清外泌体抽提试剂盒再次提取？对提取的外泌体有没有上限？添加是否也是按照体积比进行添加抽提试剂？

A: 可以的，对重新提取的外泌体没有上限要求，等比例添加就好。也推荐超滤管的方式。

Q8:沉淀法应该是不会对已经染色的外泌体有影响吧？

A: 沉淀法对染色的外泌体没什么影响。

Q9: 细胞培养上清外泌体快速抽提试剂盒，开封之后2-3个月，客户封口保存了，但是现在变成粉末了。可以复溶之后继续使用吗？

A: 一般导致这个的原因可能是瓶子没拧紧，不建议再使用了，建议重新购买。