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Q12204ES12907ES 12609ES 区别与联系?

A12204 为完整的建库试剂盒,包含片段化模块,连接模块,扩增模块12609 为片段化模块,可同时进行样本的片段化,末端修复/A流程12907 为单酶(原料酶),仅用于DNA 片段化。

Q:12907里面的酶是什么酶?能否作用于RNA?产生的片段末端是平末端还是黏性末端?

A:是一些随机内切酶,作用于dsDNA,产生的末端是黏性末端。

Q:产品使用时能否用单酶搭配机械法流程建库试剂盒,如 12907+12199?

A:可以。实际使用时我们建议购买完整试剂盒(Cat#12204,该试剂盒经过流程的优化可获得优异的建库表现。如果想要购买 12907 搭配其他品牌建库试剂盒,建议片段化之后先进行纯化再接其他品牌建库试剂盒。

Q:酶切模块可否适用 MGI 平台?

A:片段化酶切模块 12907可通用于各类平台

QgDNA 片段化参考说明书酶切条件酶切 20 min,竟然切不动?

A一般优先考虑 DNA 的质量问题,比如 Input DNA 中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐离子,可能会影响酶切效果,建议将DNA 稀释在 ddH2O 或不含EDTA  10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中再进行片段化。其次,如果样本是反转录得到的全长cDNA,则需考虑样本纯度问题。另外,对于环状DNA 的酶切,需要另行摸索酶切时间体系。特殊样本可考虑磁珠纯化之后进行酶切或适当延长酶切时间。

Q:酶切时间也不长,竟然过度酶切了?

A以插入片段 300 bp 为例,白细胞 gDNA30 度酶切 10min,出现如下图过度酶切现象。建议参考酶切条件需要考虑不同样本gDNA 大小,如白细胞gDNA 较小,应适当缩短酶切时间,否则易出现过度酶切现象

Q:最低可以切到多小片段?

A:有小片段保护机制,最低可到150bp左右。

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