真核生物中mRNA经转录后修饰在5'端形成一个特殊结构，即帽子结构，该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶，其由D1和D12两个亚基组成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性，可将7-甲基鸟嘌呤帽结构（m7Gppp）连接到RNA的5'末端（m7Gppp5'N）。牛痘病毒加帽酶，在合适浓度的加帽缓冲液（Capping buffer），鸟苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在条件下，能够在一个小时之内对RNA进行加帽，并且保证正确的方向。

本试剂盒应用双抗夹心酶联免疫检测（ELISA）的实验原理进行牛痘病毒加帽酶残留量检测，将牛痘病毒加帽酶标准品和待测样本加入预包被抗牛痘病毒加帽酶抗体的酶标板（36709-A），然后加入稀释后的生物素标记的牛痘病毒加帽酶检测抗体（36709-C），最后加入Streptavidin-HRP（SA-HRP）（36709-D），形成抗体+抗原+抗体‐Biotin+ SA‐HRP 复合物，洗板后加入TMB显色液（36709-H）显色。TMB在HRP酶的催化下由无色转化成蓝色并在终止液（36709-I）的作用下最终转化成黄色。黄色的深浅与样本中被检测到的牛痘病毒加帽酶的量呈正相关。