Hoechst 33258 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，它在嵌入双链 DNA 后释放强烈的蓝色荧光，对细胞的毒性较低。Hoechst 33258 常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。也可以用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。可用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可用于活细胞或组织的细胞核染色。

本系列产品均以溶液形式提供，其中Hoechst 33258 染液 (1 mg/mL)（Cat No.40730ES03）为特定浓度的产品，其浓度为1 mg/mL。用于细胞核染色时，推荐工作浓度为0.5-10 μg/mL。如需使用粉末状该产品，可选购Hoechst 33258（Cat No. 40729ES25）。
 

产品性质

运输与保存方法

冰袋（wet ice）运输。4℃避光保存。

1 mg/mL 的Hoechst 33258储存液，有效期1年。
 

使用方法

对于1 mg/mL的Hoechst33258在使用时需用PBS或合适的缓冲液配制成0.5-10 μg/mL的染色液。

1. 对于固定的细胞或组织：

a）对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33258染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33258 染色。

b）对于贴壁细胞或组织切片，加入少量 Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞，至少加入待染色样品体积 3 倍的染色液，并混匀。室温放置 3～5分钟。

c）吸除 Hoechst 33258 染色液，用 TBST、PBS 或生理盐水洗涤 2～3 次，每次3～5 分钟。

d）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。观察细胞凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。激发波长350 nm，发射波长460 nm。

2. 对于活细胞或组织：

a）细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。 

b）在适宜于细胞培养的温度培养 20～30 分钟。

c）弃染色液，用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

d）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350 nm，发射波长460 nm。

Q:染液 33258 和 33342 这两个什么区别？

A: 两者区别不大，但是 Hoechst 33342 对细胞的毒性作用更小一些，因此一般 Hoechsts 33258 用于细胞固定后再染色，而 Hoechst 33342 则可以对活细胞直接进行染色。

Q．DAPI和Hoechst染料相当类似，如何二选一？
A：DAPI是非常通用的蓝色荧光染料，用于细胞核复染。对固定和透化的细胞/组织，具有非常明亮的细胞核标记。然而，此染料被认为是半渗透至不渗透的染料，用于活细胞染色的结合不一致。Hoechst 33342是一种细胞膜渗透性的染料，具有同DAPI的结合机制和荧光特征。非常适合用于活细胞成像，效果就如同DAPI用于固定细胞染色。